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          技術(shù)文章

          Technical articles
          小鼠I型α干擾素(IFN-αI)ELISA實(shí)驗(yàn)說明
          更新時(shí)間:2025-01-15 點(diǎn)擊次數(shù):734

          檢測范圍                                                       

          1.5pg/ml-50pg/ml

           

          使用目的

          本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中I型α干擾素(IFN-αI)含量。

           

          實(shí)驗(yàn)原理

          本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠I型α干擾素(IFN-αI)水平。用純化的小鼠I型α干擾素(IFN-αI)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入I型α干擾素(IFN-αI),再與HRP標(biāo)記的I型α干擾素(IFN-αI)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的I型α干擾素(IFN-αI)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠I型α干擾素(IFN-αI)濃度。

           

          試劑盒組成

          1

          30倍濃縮洗滌液

          20ml×1瓶

          7

          終止液

          6ml×1瓶

          2

          酶標(biāo)試劑

          6ml×1瓶

          8

          標(biāo)準(zhǔn)品(96pg/ml)

          0.5ml×1瓶

          3

          酶標(biāo)包被板

          12孔×8條

          9

          標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          1.5ml×1瓶

          4

          樣品稀釋液

          6ml×1瓶

          10

          說明書

          1份

          5

          顯色劑A液

          6ml×1瓶

          11

          封板膜

          2張  

          6

          顯色劑B液

          6ml×1/瓶

          12

          密封袋

          1個(gè)







          標(biāo)本要求 

          1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

          2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

          操作步驟

          1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

          48pg/ml

          5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

          150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          24pg/ml

          4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

          150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          12pg/ml

          3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

          150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          6pg/ml

          2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

          150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          3pg/ml

          1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

          150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

           

          2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

          3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

          4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

          5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

          6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

          7. 溫育:操作同3。

          8. 洗滌:操作同5。

          9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

          10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

          11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。


          完整版說明書可咨詢我司業(yè)務(wù)員。上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司是國內(nèi)ELISA試劑盒優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商,代理銷售不同ELISA試劑盒品牌的進(jìn)口/國產(chǎn)ELISA試劑盒,專業(yè)供應(yīng)科研實(shí)驗(yàn)所需的培養(yǎng)基,抗體,動(dòng)物血清血漿,標(biāo)準(zhǔn)品對照品,化學(xué)試劑,酶聯(lián)免疫試劑盒,白介素試劑盒,金標(biāo)檢測試劑盒,微生物,蛋白質(zhì),ELISA種屬涵蓋廣,憑借多年行業(yè)經(jīng)驗(yàn),*的售后服務(wù),高質(zhì)量的產(chǎn)品。如果您有實(shí)驗(yàn)上的問題歡迎來咨詢。

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